名称：

pCMS-EGFP载体

目录号 IPD8074

质粒类型：荧光蛋白报告载体

启动子：CMV

克隆方法：多克隆位点，限制性内切酶

载体大小：5541 bp

载体标签：EGFP

载体抗性：Ampicillin (氨苄青霉素)

使用pCMS-EGFP载体时，以下是一些重要的注意事项：

克隆方向性：克隆到多克隆位点（MCS）的基因必须包含起始ATG密码子。

转染方法：pCMS-EGFP及其衍生物可以通过任何标准方法引入哺乳动物细胞。转染后的细胞可以基于EGFP的荧光通过流式细胞仪进行监测和/或筛选。

蛋白表达：pCMS-EGFP使用增强型绿色荧光蛋白（EGFP）作为转化标记。EGFP是从Aequorea victoria中野生型GFP的一个红移变体，已优化以在哺乳动物细胞中实现更亮的荧光和更高的表达。

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西方印迹分析：EGFP编码GFPmut1变体，包含Phe-64到Leu和Ser-65到Thr的双氨基酸替换，以及超过190个沉默碱基变化，对应于人类密码子使用偏好。

质粒保存和运输：质粒干粉应在-20°C下保存，运输时常温条件即可。收到后请先转化提质粒后使用。

质粒复溶：收到质粒干粉后请先5000rpm离心1分钟，再加入20μl无菌水溶解质粒。

感受态细胞处理：从-80°C冰箱中取出感受态细胞，置于冰上解冻，并做好标记。取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30分钟，42℃热激60秒，再冰浴2分钟。

培养条件：加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45分钟。6000rpm离心5分钟，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上。

菌落挑选和培养：将平板倒置37°C培养14小时，挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14小时，根据实验需要提取质粒。

质粒抗性：pCMS-EGFP载体的抗性标记为氨苄青霉素（Ampicillin）。

发布于：湖北省